2022年7月7日，中華人民共和國海關總署發布了2022年第57號公告（關于發布《進境種用雛禽指定隔離檢疫場建設規范》等90項行業標準的公告），其中《梨波氏盤菌果腐病菌檢疫鑒定方法》SN/T 5467-2022自2023年2月1日起實施，本文對該行業標準進行解讀。
一、什么是梨波氏盤菌果腐病菌？
梨波氏盤菌果腐病菌Potebniamyces pyri是一種危害蘋果、梨等植物的病原菌，除了引起果樹樹皮的潰瘍或壞死外，還可以引起儲藏期梨果的腐爛病，據美國提供材料，該有害生物是美國梨上新發現的收獲后有害生物。該病目前分布于德國、英國、烏克蘭、俄羅斯、塞浦路斯、加拿大、美國的俄勒岡州和華盛頓州等地，中國無分布，在美國華盛頓州發生最為嚴重，給當地梨的生產帶來了嚴重的經濟損失。2004年，Xiao等人對華盛頓州d'Anjou梨儲藏期病害的調查結果表明，梨波氏盤菌腐爛病是梨果儲藏期腐爛病的重要組成部分，大約有30%的梨腐爛病是由P. pyri引起的。該菌一旦傳入我國，將給我國的梨產業帶來嚴重影響。本實驗室在2013年首批進境的美國梨中分離到該病菌，但由于其與其他弱寄生菌復合侵染的特性，經歷了長時間的分離純化培養，才鑒定出該病菌。亦由于它的復合侵染特性，在檢疫過程中非常容易被忽略，發生漏檢的現象，因此研發其相應的檢測方法或通過查閱已報道文獻進行方法驗證，以形成梨波氏盤菌果腐病菌的檢測的推薦性方法，并形成包括分離培養、檢測技術、基本信息介紹在內的《梨波氏盤菌果腐病菌檢疫鑒定方法》的行業標準，對于我國口岸對于該病菌的檢疫工作具有重大意義。
二、該標準的適用范圍：
本標準規定了梨波氏盤菌果腐病菌的檢疫鑒定方法。
本標準適用于進境鮮梨、蘋果及相關寄主植物產品攜帶的梨波氏盤菌果腐病菌的檢疫鑒定。
三、如何檢測梨波氏盤菌果腐病菌？
1.癥狀觀察：仔細檢查果蒂、果萼及果實表面是否有腐爛病斑、菌絲、分生孢子器等。
2.病菌的分離、純化及形態觀察：果實樣品，采用進行 75 % 酒精表面擦拭消毒，快速過火，切開去表皮，在病健交界處取樣，切成 4 × 4 mm 小塊。置于 PDA 平板上，20 ℃ 條件下 20 d 后進行分生孢子器觀察。
3.PCR 檢測：采用引物 ITS1/ITS4 可擴增出約 550 bp的特異性條帶，Bt-LEV-Up4 / Bt-LEV-Lo1 擴增后可得到 664 bp的條帶，將條帶回收測序，進行 Blast 比對，應與Potebniamyces pyri的序列同源性達 99 % 以上。
四、該標準的特點：
1. 方便、快速，操作簡便
本標準建立了梨波氏盤菌果腐病菌的分離培養方法和分子生物學檢測方法，是典型的傳統形態學鑒定與分子生物學鑒定相結合的病原真菌鑒定方式，通過方法的建立，可指導口岸一線人員快速對疑似目標物進行定性，大大縮短了無標準方法時的大量摸索工作。
2. 廣泛適用性
該方法所涉及的檢測方法及設備均為口岸實驗室常規設備，操作簡便、快捷，技術難度不高，且可同批次處理大量樣品。為口岸實驗室在進境植物產品中的檢測工作提供了便捷。
供稿單位：綜合業務司、大連海關
